§ 8. Количественное определение токсических веществ, изолированных подкисленной водой или подкисленным спиртом

Количественное определение токсических веществ, выделенных из биологического материала, является заключительным этапом химико-токсикологического анализа. Количественное определение токсическихвеществпроизводится после ихидентификации. Приидентификациимогут быть обнаружены токсическиевещества, которые приняты умершим перед смертью в терапевтическихдозах(с лечебной целью) и не были причиной отравления.Дозуяда, поступившего ворганизм, можно оценить только на основании результатов количественного определения.

В химико-токсикологическом анализе для количественного определения токсических веществ, выделенных из биологического материала и других объектов, применяются чувствительные фотоколориметрические, спектрофотометрические, газохроматографи-ческие и некоторые другие методы. Ввиду малой чувствительности гравиметрических и титримегрических методов они практически не применяются в химико-токсикологическом анализе. Выделенные из биологического материалавещества, которые подвергаются количественному определению, должны быть хорошо очищены от белковых соединений, продуктов их разложения, образующихся в трупном материале, и от других примесей.

Несмотря на большое значение результатов количественного определения ядовитых веществ, выделенных из биологического материала, для решения вопроса об отравлениях в ряде случаев результаты этих определений могут быть занижены. Это объясняется рядом причин.

Токсические веществаворганизмев определенной степени подвергаютсяметаболизму.Вещества, вызвавшие отравление, неравномерно распределяются в органах итканяхорганизма. В одних органах этивеществанаходятся в больших количествах, чем в других, а в некоторых органах итканяхэтивеществамогут отсутствовать. Поэтому результаты химико-токсикологического анализа зависят от правильного выбора органов итканей, направляемых на исследование. Ядовитыевеществаворганизмесвязываются с белковыми и другими соединениями. Количество выделяемыхвеществ, переходящих в вытяжки из биологического материала, зависит от применяемого метода выделения токсическихвеществиз соответствующих объектов. Количество токсическихвеществ, выделенных из биологического материала, зависит и от степени гнилостного разложения исследуемых объектов. Влияние указанных выше факторов на выделение токсическихвеществнеобходимо учитывать при оценке результатов количественного определения ядов, выделенных из биологического материала в ходе химико-токсикологического анализа.

§ 9. Метод выделения токсических веществ, основанный на изолировании их этиловым спиртом подкисленным щавелевой кислотой

Первый метод выделения алкалоидовиз биологического материала, основанный на изолировании этихвеществэтиловым спиртом, подкисленнымщавелевой кислотой, предложил Стас. Затем этот метод модифицировал Отто. В литературе описан ряд недостатков этого метода (см. § 1). Учитывая недостатки метода Стаса — Отто, он не применяется в современном химико-токсикологическом анализе, а применяется ряд модификаций указанного метода. Одна из них приводится ниже.

100 г тщательно измельченного биологического материала вносят в широкогорлую колбу вместимостью 500 мл, заливают этиловым (96°) спиртомдо покрытия им твердых частиц исследуемого объекта. Смесь биологического материала иэтилового спиртаподкисляют 10 %-м спиртовымрастворомщавелевой кислоты. Содержимое колбы периодически перемешивают стекляннойпалочкой. Через некоторое время проверяют рН содержимого колбы и при необходимости прибавляют 10 %-й спиртовойрастворщавелевой кислотыдо рН = 2...3.

Колбу слегка закрывают пробкой, оставляют на сутки в теплом месте (25—30 °С) при периодическом перемешиванииее содержимого. После этого кислую спиртовую вытяжку сливают с биологического материала. Настаивание биологического материала с новыми порциямиэтилового спирта, подкисленного 10%-мрастворомщавелевой кислотыдо рН = 2...3, производят еще 3—4 раза (в течение суток каждый раз).

Кислые спиртовые вытяжки из биологического материала соединяют и переносят в фарфоровую чашку. Биологический материал переносят на фильтр и промываютэтиловым спиртом.Этиловый спирт, которым промывают биологический материал, присоединяют к полученным вытяжкам. Объединенные спиртовые вытяжки упаривают до густоты сиропа на водяной бане, нагретой до 40 °С. К сиропообразнойжидкостиприперемешиваниистекляннойпалочкойпо каплям прибавляютэтиловый спирт(96°) до прекращения выпадания примесей в осадок. Образовавшийся осадок отфильтровывают, фильтр промываютэтиловым спиртом. Фильтрат снова упаривают на водяной бане до густоты сиропа, как указано выше. Из сиропообразного остатка примеси осаждаютэтиловым спиртом. Упаривание спиртовых фильтратов иосаждениепримесейэтиловым спиртомиз сиропообразнойжидкостипроводят многократно (до прекращенияосажденияпримесей от прибавления этилового спирта).

К очищенной таким образом сиропообразной жидкостиприбавляют 25 млводы. Если при этом образуется осадок, его отфильтровывают.

Кислую водно-спиртовую жидкостьпереносят в делительную воронку, прибавляют 10—15 млхлороформаи легко взбалтывают в течение 5 мин, а затем отделяют хлороформную вытяжку. Кислую водно-спиртовуюжидкостьеще 2—3 раза взбалтывают с новыми порциямихлороформа(по 10—15 мл). Хлороформные вытяжки из кислой водно-спиртовойжидкостисоединяют и исследуют на наличие ядовитых соединений, экстрагирующихся органическимирастворителямииз кислой среды.

Оставшуюся в делительной воронке кислую жидкостьподщелачивают 25 %-мраствором аммиакадо рН = 9...10. Из этой подщелоченнойжидкостиалкалоидыи другие токсическиевещества3—4 раза экстрагируют новыми порциямихлороформа(по 10— 15 мл). Хлороформные вытяжки соединяют и исследуют на наличиеалкалоидови некоторых других токсическихвеществосновного характера.

Описанный выше метод выделения токсических веществиз биологического материала, основанный на изолировании ихэтиловым спиртом, подкисленнымщавелевой кислотой, является трудоемким. Для выделения токсическихвеществиз биологического материала с помощью этого метода требуется 8—10 рабочих дней. На один анализ расходуется около 500 млэтилового спирта. В связи с большим количеством операций, связанных сосаждениемпримесей из вытяжек, в ходе химико-токсикологического анализа могут теряться определенные количества ядовитыхвеществ, адсорбирующихся примесями.

Несмотря на указанные выше недостатки метода изолирования токсических веществподкисленнымэтиловым спиртом, этот метод является эффективным для выделения ядовитых соединений из гнилостного биологического материала.