§ 38. Анабазин
Анабазин—алкалоид, содержащийся в ежевнике безлистном. Небольшие количестваанабазинасодержатся в табаке. Основаниеанабазинапредставляет собой бесцветную маслянистуюжидкость, которая хорошо растворяется вводеи ряде органическихрастворителей.
Анабазинэкстрагируется органическимирастворителямикак из кислых, так и из щелочных водныхрастворов. Однако большие количестваанабазинаэкстрагируются из щелочных водныхрастворов, из которых он перегоняется с водянымпаромбез разложения.
Применение. Действие на организм.Анабазина гидрохлоридприменяется в видетаблетокдля облегчения отвыкания от курения. Сумма сульфатовалкалоидов, выделенных из ежевника безлистного, в смеси с хозяйственныммыломприменяется в сельском хозяйстве для борьбы с вредителями растений. Для указанной цели также применяется анабадуст.Анабазинприменяется в ветеринарии для борьбы с вшивостью животных, для лечения стригущего лишая и чесотки у животных и т. д.
В малых дозаханабазинвозбуждает центральную нервную систему, усиливаетдыхание, повышает кровяноедавление, возбуждает ганглии вегетативной нервной системы. В большихдозаханабазиноказывает угнетающее и парализующее действие вегетативных ганглиев.Анабазинпроникает ворганизмс вдыхаемымвоздухом, а также через неповрежденнуюкожуи можетдаватьтяжелые отравления. Выделяется изорганизмас мочой.Метаболизманабазинаизучен недостаточно.
Выделение анабазина из биологического материала.Для выделенияанабазинаприменяют метод, основанный на изолированииалкалоидовводой, подкисленнойсерной кислотой, а также методперегонкис водянымпаром.
Один из методов выделения анабазинаоснован на том, что биологический материал настаивают сводой, подкисленнойсерной кислотой. Полученную кислую вытяжку фильтруют или центрифугируют, подщелачивают и взбалтывают схлороформомили другими органическимирастворителями, в которые переходит основаниеанабазина.
Учитывая летучестьоснованияанабазина, хлороформную вытяжку насыщают газообразнымхлороводородом. В результате этого основаниеанабазинапереходит в нелетучий гидрохлорид этогоалкалоида. После этого хлороформную вытяжку выпаривают досуха. В сухом остатке определяют наличиеанабазина. Подробно методика выделенияанабазинаиз биологического материала приводится ниже.
Для насыщения хлороформной вытяжки газообразным хлороводородомберутколбу Вюрца вместимостью 50—100 мл, в которую вносят 25 млрастворасоляной кислоты(плотность 1,19). Колбу Вюрца закрывают пробкой с капельной воронкой, в которую вносят концентрированнуюсерную кислоту(плотность 1,84). Затем из капельной воронки ксоляной кислотепо каплям прибавляют концентрированнуюсерную кислоту. При этом выделяется газообразныйхлороводород, который в течение 2—3 мин пропускают через хлороформную вытяжку из биологического материала, содержащуюанабазин.
Получение хлороводорода и насыщение им хлороформной вытяжки проводят под тягой.
В стаканвместимостью 500 мл вносят 100 г измельченного биологического материала (печень, почки, желудок с содержимым и др.) и приливают такое же количество 0,02 н.растворасерной кислоты, чтобыжидкостьполностью покрыла твердые частицы исследуемого объекта. Смесь хорошо перемешивают и проверяют рН по универсальномуиндикатору(рН смеси должен составлять ~ 2,5). При необходимости прибавляют 10 %-йрастворсерной кислотыдо рН = 2,5. Смесь оставляют на 2 ч при периодическомперемешивании, затем сливают водную вытяжку и процеживают ее черезмарлю, а биологический материал еще 2 раза настаивают с новыми порциями 0,02 н.растворасерной кислоты, как указано выше.
Водные вытяжки соединяют, переносят в стакан(пробирку) дляцентрифугированияи центрифугируют. Центрифугат сливают, оставшийся встакане(пробирке) твердый остаток перемешивают стекляннойпалочкой, прибавляют к нему 5—10 мл 0,02 н.растворасерной кислотыи снова центрифугируют. Центрифугат сливают и присоединяют его к ранее полученному центрифугату.
К объединенному центрифугату прибавляют порошкообразный сульфат аммониядо насыщения (при этом рНжидкостидолжно сохраняться~2,5). Смесь центрифугата исульфата аммонияоставляют на 2 ч, после чего осадок отделяютцентрифугированием. Центрифугат переносят в делительную воронку и 2 раза в течение 5—10 мин взбалтывают сдиэтиловым эфиром(порциями по 50 мл). Эфирные вытяжки отделяют и в дальнейшем не исследуют.
Оставшийся в делительной воронке кислый растворподщелачивают 5 %-мрастворомгидроксида натриядо рН = 8,5...9,0 и 3 раза взбалтывают схлороформом(порциями по 50 мл). Хлороформные вытяжки соединяют, фильтруют через бумажный фильтр, а затем фильтрат насыщают газообразнымхлороводородомв течение 2—3 мин и отгоняютхлороформдосуха. Сухой остаток или егорастворвхлороформеиспользуют дляидентификациии количественного определенияанабазина.
Обнаружение анабазина
Реакция с реактивом Драгендорфа. На предметное стекло наносят 2—3 капли хлороформногораствораисследуемоговеществаи выпаривают досуха. К сухому остатку прибавляют каплю 0,1 н.растворасоляной кислотыи каплю реактива Драгендорфа. Предметное стекло вносят во влажную камеру (см. гл. 3, § 2) на 20—30 мин, а затем продукт реакции рассматривают под микроскопом. Появление сростков, состоящих из оранжево-красныхкристаллов, имеющих игольчатую форму, указывает на наличиеанабазинав исследуемомрастворе. Предел обнаружения: 1 мкганабазинав пробе.
С реактивом Драгендорфа кристаллические осадки даютко-ниин,никотини ряд других азотсодержащихвеществ. Однако формакристаллованабазинас реактивом Драгендорфа отличается от формыкристалловдругих указанныхвеществ.
Реакция с солью Рейнеке. На предметное стекло наносят 2— 3 каплираствораисследуемоговеществаи выпаривают досуха. К сухому остатку прибавляют каплю 0,01 н.растворасоляной кислотыи каплю 1 %-го свежеприготовленногорастворасолиРейнеке. При наличиианабазинав пробе через несколько минут под микроскопом наблюдаются сростки, состоящие из мелких игольчатыхкристаллов, которые несколько увеличиваются при стоянии. Предел обнаружения: 0,7 мкганабазинав пробе.
Реакцию с сольюРейнекедаетиникотин, но формакристалловрейнекатаникотинаотличается от формыкристалловрейнекатаанабазина.
Реакция с пикриновой кислотой.К капле исследуемогораствораприбавляют 2 капли насыщенногорастворапикриновой кислоты. При наличиианабазинаврастворевыпадает желтый кристаллический осадок.Никотиннедаетэтой реакции.
Реакция с реактивом Бушарда.К 2—3 каплям исследуемогораствораприбавляют каплю реактива Бушарда. При наличиианабазинавыпадает красно-бурый осадок. Эту реакциюдаетиникотин.
Реакция с пергидролем.В пробирку вносят 1 мл исследуемогораствора, 1 мл пергидроля и 2—3 капли концентрированнойсерной кислоты. Появление красной или шоколадно-коричневой окраски указывает на присутствиеанабазинаврастворе. Эту реакциюдаетиникотин.
Реакция с ванилином.К 1 мл исследуемогораствораприбавляют кристалликванилинаи 1—2 капли концентрированнойсоляной кислоты. Появление красной или вишнево-красной окраски указывает на наличиеанабазинав пробе. Эту реакциюдаетиникотин.
Фотоколориметрическое определение анабазина
Описанный ниже метод фотоколориметрического определения анабазинабазируется на реакции Кенига, который установил, что при взаимодействиипиридинаи его производных, имеющих свободные α- и α'-положения, схлорцианомили бромцианом образуетсяхлоридили бромид цианпиридиния:
При взаимодействии цианпиридиния с водойобразуется глутаконовыйальдегид, который может быть в двух таутомерных формах:
Необходимый для реакции Кенига хлорцианможет быть получен при взаимодействиихлораминасцианидами:
Учитывая высокую токсичностьхлорциана, в последнее время ряд исследователей рекомендуют заменить его бромроданом (BrSCN).
С. И. Банки другие исследователи использовали описанную выше реакцию Кенига для фотоколориметрического определенияанабазина,никотинаи других производныхпиридина. С этой целью крастворуанабазинаприбавляютцианид калияихлорамин Б. При этом образуется производное глутаконовогоальдегида:
При взаимодействии производного глутаконового альдегидасбарбитуровой кислотойобразуется краситель, имеющий желто-оранжевую окраску:
Выполнение определения:20 мл указанной выше хлороформной вытяжки, насыщенной газообразнымхлороводородом, выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 5 млводы, 1 мл этогорастворавносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 2 мл 1 %-го водногорастворацианида калия(осторожно — яд!) и 5 мл 1 %-го водногорастворахлорамина Б.Жидкостьхорошо взбалтывают и через 5 мин прибавляют 10 мл 0,5 %-го водногорастворабарбитуровой кислоты, а затем объемжидкостив колбе доводятводойдо метки.Жидкостьхорошо перемешивают и через 50 мин измеряют оптическую плотность окрашенного в желто-оранжевый цветрастворас помощью фотоэлектроколориметра ФЭК-М (светофильтр зеленый, кювета 10 мм). В качестверастворасравнения применяют смесь, состоящую из 2 млрастворацианида калия, 5 млрастворахлорамина Б, 10 млрастворабарбитуровой кислотыи 33 млводы.
Содержание анабазинав пробе рассчитывают по калибровочному графику. Для построения этого графика в 6 мерных колб вместимостью 50 мл каждая вносят по 0,1; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 и 1,0 мл стандартногораствораанабазина(в 1 мл содержится 1 мг этого препарата). В первые 5 мерных колб прибавляютводудо 1 мл, затем во все колбы прибавляют по 2 мл 1 %-горастворацианида калияи по 5 мл 1 %-горастворахлорамина Б, а далее поступают, как указано выше.